Идентификация нового В-клеточного эпитопа на шиповидном белке вируса эпидемической диареи свиней

Вирус эпидемической диареи свиней (ВЭДС) — высокопатогенный коронавирус, наносящий значительный ущерб свиноводству. Спайковый (S) белок ВЭДС, обеспечивающий проникновение вируса в клетку, является основной мишенью иммунного ответа. Выявление консервативных эпитопов в этом быстро эволюционирующем белке критически важно для разработки диагностических и профилактических средств.

В данном исследовании для иммунизации мышей использовали очищенные вирионы штамма ВЭДС G2c TRS2021. Было получено семь моноклональных антител (мАТ) к S-белку: 1F11, 2C4, 3D11, 3G7, 4G5, 8B2 и 8E4. Анализ показал, что только mAb 4G5 распознаёт линейный эпитоп, в то время как остальные шесть нацелены на конформационные эпитопы.

Для точного картирования эпитопа mAb 4G5 была проведена серия экспериментов с усечёнными вариантами S-белка, экспрессированными в клетках Vero. Методами иммунофлуоресценции и вестерн-блоттинга удалось локализовать целевой участок. Эпитоп был определён как линейная последовательность 1273NATYLNLTGE1282, расположенная в С-концевой области S2-субъединицы белка.

Анализ консервативности выявленного эпитопа на множестве циркулирующих штаммов ВЭДС (генотипы G1 и G2) показал его высокую сохранность. Моделирование пространственной структуры S-белка с помощью AlphaFold подтвердило поверхностную локализацию данного эпитопа, что объясняет его доступность для антител.

Оценка специфичности семи полученных mAb к различным штаммам ВЭДС выявила различия в широте реактивности. mAb 4G5, наряду с 1F11, 3D11 и 3G7, продемонстрировали широкий спектр, распознавая все протестированные штаммы, что подчёркивает консервативную природу их эпитопов.

Выводы:

1. С использованием очищенных вирионов ВЭДС в качестве иммуногена успешно получено семь новых моноклональных антител к S-белку.

2. Идентифицирован новый линейный В-клеточный эпитоп 1273NATYLNLTGE1282, демонстрирующий высокую консервативность среди различных штаммов ВЭДС.

3. Выявление данного консервативного эпитопа вносит вклад в понимание антигенности S-белка ВЭДС и открывает перспективы для разработки серологических диагностических тестов и вакцин на основе эпитопов.

Основные методы: очистка вирионов градиентным центрифугированием, иммунизация мышей, гибридомная технология, непрямой иммунофлуоресцентный анализ, вестерн-блоттинг, экспрессия усечённых белков в эукариотических системах, анализ консервативности последовательностей.


Исследование: Animal Diseases