Способ дифференциальной диагностики возбудителей хламидийных инфекций у свиней с помощью молекулярно-генетического метода.

4167

Авторы разработки: Коваленко А.М., Сапегин В.М., Жабина.,
Писаренко В.Ф., Левицкая И.Л.

Дифференцировать хламидиозы можно с помощью серологических реакций, иммуноферментного анализа и молекулярно-генетических методов, но невозможно только лишь с помощью культурального, серодиагностики и аллергологического методов своевременно и точно выявить инфицированных возбудителями хламидиозов животных.

Генетические исследования связаны с анализом полиморфизма длины рестрикционных фрагментов хромосомной ДНК хламидий, ДНК – гибридизации, наличию и свойствами плазмид.

Современная классификация основывается на генетическом анализе (секвенировании ДНК хламидий). Согласно современным подходам геносистематики для описания бактериальных таксонов на уровне видов, родов, классификация хамидий и хламидиоподобных микроорганизмов базируется на наличии >95% гомологии в нуклеотидной последовательности генов 16S и 23S рРНК для всех представителей рода и >90% семейства.

Разработанная нами ПЦР тест-система (Хлами-суис БелГСХА) предназначена для диагностики хламидиозов свиней с помощью молекулярно-генетического метода позволяет детектировать Chlamydiaceae и дифференцировать возбудителей хламидиозов свиней до вида (Chl. psittaci, Chl. pneumoniae, Chl. suis, Chl. pecorum). Существующие аналогичные тест-системы для ПЦР-диагностики позволяют детектировать возбудителей хламидиозов только до семейства (Хла-ком пр-ва ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) или детектировать лишь один вид (Chlamydophila psittaci Хла-псит пр-ва ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Chlamydophila pneumoniae АмплиСенс ФГУН ЦНИИЭ Роспотреб-надзора и т.д.).

Разработанные схемы семейсвенно- и видоспецифической диагностики хламидиозов на основе собственных (оригинальных) праймеров позволила идентифицировать соответственно до семейства и вида принадлежность хламидий, сенсибилизирующих у свиней. В первом раунде амплификации получали семейсвенноспецифический продукт. Во втором раунде амплификации использовали этот продукт в качестве матрицы и получали видоспецифические продукты, которые разделяли в агарозном геле.
Разработанная нами ПЦР тест-система позволяет:
• проводить быструю детекцию возбудителей хламидиозов свиней.
• обладает высокой специфичностью (позволяет детектировать возбудителей до вида).
• имеет высокую чувствительность (позволяет обнаружить единичные молекулы или обрывки ДНК хламидий).

Сравнительная характеристика с существующими отечественными и зарубежными аналогами

Сравнительное изучение специфичности и чувствительности ПЦР тест-системы «Хлами-суис БелГСХА» в сравнении с существующими аналогами производства ФГУ ЦНИИЭ Хла-ком, Хла-псит, АмплиСенс, а также ИФА производства ЗАО Вектор-Бест ХламиБест-IgG и ИФА-Хламидия-IgG представлены в таблице 1. Пробы клинического материала отбирали со слизистых оболочек влагалища, конъюнктивы глаз от маточного свинопоголовья с клиническими признаками хламидиоза (длительные перегулы, аборты, эндометриты) в ООО «Белгранкорм» пр-во «Шебекинская свинина». Исследования проб проводили совместно с сотрудниками Белгородской межобластной ветеринарной лаборатории.

Таблица 1. Результаты специфичности и чувствительности исследуемых тест-систем для выявления свиней инфицированных возбудителями хламидиозов
<"Диагностики возбудителей хламидийных инфекций/>

<"Диагностики возбудителей хламидийных инфекций/>

Разработанная нами ПЦР тест-система «Хлами-суис БелГСХА» позволяет выявить животных инфицированных Chl. suis. По остальным показателям были получены идентичные результаты в сравнении с коммерческими ПЦР тест-системами ХЛА-КОМ (16 положительных и 4 отрицательных пробы), ХЛА-ПСИТ (3 положительных и 17 отрицательных проб) и АмплиСенс (11 положительных и 9 отрицательных проб) производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора. Однако, ИФА тест-система ХламиБест-IgG ЗАО Вектор-Бест в сравнении с ПЦР тест-системами показала несколько ложно-отрицательных результатов (2) при детекции Chl. psittaci (1 положительная проба и 19 отрицательных) и Chl. pneumoniae (7 положительных и 13 отрицательных результатов). ИФА тест-система ИФА-Хламидия-IgG ЗАО Вектор-Бест показала одинаковые результаты с существующими ПЦР тест-системами (1 положительная и 19 отрицательных проб).

Таким образом, только разработанная нами ПЦР тест-система «Хлами-суис БелГСХА» позволяет выявить животных, инфицированных возбудителями Chl. suis.

Источник: Журнла Перспективное свиноводство: Теория и Практика - январь 2011г.

Возврат к списку статей