Адаптация метода сентенелей для биологического контроля африканской чумы свиней в свинокомплексах

Джаилиди Г.А. Государственное управление ветеринарии Краснодарского края, г. Краснодар
Черных О.Ю. ГБУ КК"Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория", г. Кропоткин
Стрижакова О.М., Куриннов В.В. ГНУ ВНИИВВиМ, г. Покров

Введение. При острой и подострой формах течения африканской чумы свиней (далее, АЧС) размножение вируса в организме зараженной свиньи сопровождается экскрецией вируса во внешнюю среду носовыми и лакримальными секретами, слюной, калом, мочой уже в инкубационном периоде, а при развитии инфекции — и кровотечениями. В связи с тем, что при вспышке АЧС вирус хорошо сохраняется в белковых средах вне организма хозяина (то есть в указанных выше выделениях), всегда существует риск "остаточного" вируса в ранее контаминированных объектах, даже несмотря на хорошо выполненные мойку и дезинфекцию. Поэтому, имея в виду исключительно высокую инфекционность вируса АЧС, сроки ввода животных (комплектование хозяйств поголовьем), определённые инструкцией [4], обозначены 12-ю месяцами - в мелкие фермы и в I-ю угрожаемую зону, и 6-ю месяцами - в промышленный комплекс после отмены карантина, но с учётом постановки биологического контроля (отрицательных результатов).

В настоящее время, подтверждение отсутствия вируса АЧС (то есть контаминации) на поверхностях пола, стен, дверей кормушек, поилок, предметов или оборудования в помещениях свиноферм и свинокомплексов основано на выполнении бактериологического метода оценки качества дезинфекции [6], однако, реально, по результатам изоляции стафилококка можно оценить только качество дезинфекции, и только косвенно, отрицательные результаты могут свидетельствовать о полном уничтожении вируса. Однако, доказательств эффекта вирулицидного действия дезинфектанта (-ов) при этом нет, так как использование "тест-вируса" Правилами не предусмотрено. Поэтому, введением метода биологического контроля, указанного в разделе 6.5.1. Инструкции, можно получить больше гарантий для принятия заключения об эффективности ветеринарно-санитарных мероприятий (то есть отсутствие вируса АЧС и безопасность фермы). Второй интерес введения биологического контроля - это сокращение периода для ввода животных в промышленные комплексы, например, через 3 месяца вместо 6-ти, как предусмотрено инструкцией [4].

Принципы метода сентенелей описаны в статье 13 Руководства МЭБ "Репопуляция свиноферм после вспышек болезни" [7]. Основная идея метода заключается в том, что при содержании поро-сят-сентенелей в ранее неблагополучных помещениях в течение 45 дней, в случае остаточных количеств вирулентного вируса АЧС произойдёт пероральное инфицирование в результате контакта с конта-минированными вирусом поверхностями, и заражение будет обнаружено либо по клиническим признакам (изменение поведения, отказ от корма и угнетение, повышение температуры тела выше 40°С), либо серологически, по обнаружению специфических антител, либо проверкой сентенелей лабораторными методами в конце периода наблюдения.

Результаты исследований. Юридическое обоснование ? для выполнения биологического контроля. В "Инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации африканской чумы свиней" [4], в разделе 6.5.1 указано: "Комплектование поголовьем животных крупных свиноводческих комплексов может быть разрешено через 6 месяцев после снятия карантина и постановки биологического контроля с разрешения Главного управления ветеринарии МСХ СССР. Размещение в таких помещениях животных других видов (включая птиц) разрешается после снятия карантина".

После письменного подтверждения разрешения о проведении биологической пробы, разрабатывают "План проведения биологической пробы", с указанием этапов мероприятий (включая подготовку акта), сроков выполнения, ответственных исполнителей (в том числе наименование лабораторий, в которых будут выполняться тестирования). Все действия и плановые мероприятия должны быть, по возможности, согласованными с действующей инструкцией, но без послаблений пунктов последней. В связи с тем, что всё-таки существует вероятность риска "индуцированной" вспышки АЧС, биологический контроль проводят только с разрешения руководителей Департамента ветеринарии и Россельхознадзора МСХ РФ. С целью предупреждения распространения вируса сразу же после начала выполнения биологического контроля (введения поросят-сентенелей) статус свинофермы (свинокомплекса) изменяют на "подозреваемый" и выполняют ограничительные мероприятия по Разделу 6, пп. 6.2.2, 6.2.3, 6.3, 6.4 Инструкции.

Приобретение и характеристика индивидуального клинического статуса сентенелей, расчёт необходимого количества.

Партии поросят (группа доращивания или первого периода откорма) приобретают только в ферме (свинокомплексе) от одного владельца с подтверждённым статусом здоровья в отношении острых вирусных (АЧС, КЧС, болезнь Ауески) и бактериальных (рожа, пастереллёз, отёчная болезнь) болезней, энтеротоксемии, отравлений и любых других заболеваний.

Перед отправкой поросята должны быть маркированы, вакцинированы против КЧС и содержаться в изоляторе (у владельца) не менее 15 дней. Там же, проводят термометрию поросят, не менее 10% от количества группы, а также от всех животных отбирают по 2 пробы крови: одна - с содержанием ЭДТА, другая - без антикоагулянта (для получения сыворотки) - так называемые "нулевые" пробы. Пробы маркируют соответственно номера животного и вида исследований, например, N°1-с (сыворотка) и N°1-э (ЭДТА), направляют в лабораторию и хранят замороженными при минус 20°С.

Расчёт минимального количества поросят выполняют произведением количества всех станков в помещениях свинофермы (свинокомплекса), где содержались свиньи до подтверждения вспышки АЧС на необходимое количество поросят-сентенелей для каждого станка (для каждого станка количество вводимых поросят из расчёта 10% от оборота (например, если в станке по технологии содержится 30 голов, то необходимое количество сентенелей на станок будет 6 голов).

Для выполнения биологического контроля делают полный запас комбикорма для кормления поросят в течение всего периода биологического контроля.

Выполнение биологического контроля. Поросят-сенте-нелей маркируют и размещают во все станки каждого помещения, свинарника, цеха (независимо от места локализации установленной вспышки) и содержат с соблюдением всех технологических норм не менее 45 дней. Это время составляет примерно три 15-ти дневных инкубационных периодов [8].

Персонал и сотрудники фермы (в том числе и ветеринарный врач), выполняющие кормление и уход за животными, а также обеспечивающие работу оборудования, на период выполнения биологического контроля не должны иметь никаких прямых и косвенных контактов с живыми домашними свиньями (и дикими кабанами при охоте) или сырой продукцией свиноводства.

Контроль здоровья поросят-сентенелей выполняет один ветеринарный врач, который ведёт наблюдение клинического состояния с обязательным ежедневным измерением температуры тела не менее 10% животных каждого станка (случайная выборка) с внесением данных в специальный журнал, с указанием производственной площадки, номеров помещений, станков, поросят и показателей для каждого животного.

На 45-й день после введения поросят в станки, от каждого животного (выборка-100%) отбирают пробы крови с антикоагулянтом и без антикоагулянта, маркируют (по п.2., как для получения "нулевых" проб) и направляют для проверки ПЦР (обнаружение вируса АЧС) и непрямой ИФА (обнаружение специфических антител к вирусу) - "проверяемые" пробы.
Оценка результатов биологического контроля и последующие действия. Об отсутствии вируса АЧС в станке можно утверждать, если после периода содержания (то есть не менее 45 дней) у свиней не были обнаружены признаки заболевания (и/или гибели) и получены отрицательные результаты лабораторных методов "нулевых" и "проверяемых" проб при 100% выборке животных (отсутствие вируса в крови, подтверждённое ПЦР и отсутствие специфических антител к вирусу АЧС, подтверждённое непрямым ИФА).

Отсутствие клинических признаков и получение отрицательных результатов лабораторных исследований у всех свиней-сентенелей гарантирует отсутствие у них АЧС и, следовательно, отсутствие вируса во всех станках и оборудования свинофермы (свинокомплекса).

В случае обнаружения признаков (угнетение, отказ от корма, повышение температуры тела выше 40°С или любые изменения поведения) хотя бы у одного животного, независимо от времени введения в станок, немедленно отбирают пробу крови с ЭДТА и направляют для лабораторных исследований на АЧС, КЧС, грипп и бактериальные инфекции (рожа, пастереллёз, гемофиллёз).

В случае получения сообщения о положительном результате ПЦР на АЧС, проводят действия в соответствии с разделами 4, 5, 6 Инструкции [4].

При обнаружении трупа(-ов) после спонтанной гибели (то есть без клинических признаков) - отбирают пробы крови, селезёнки лимфатических узлов и также направляют для экстренных лабораторных исследований. До получения результатов лабораторных исследований всех поросят термометрируют. При подтверждении АЧС - выполняют действия в соответствии с разделами 4, 5, 6 Инструкции [4]. При получении отрицательных результатов лабораторных исследований на АЧС биологический контроль продолжают.

Действия после получения заключения биологического контроля. Если биологическим контролем подтверждено отсутствие вируса АЧС в сроки, указанные в разделе 6 Инструкции, то есть через 6 мес. или более, после отмены карантина, свиней убивают на мясо и реализуют без ограничений.

Если биологический контроль выполнен с отрицательным результатом раньше указанных 6-ти месяцев - поросят-сентенелей группируют и откармливают до товарной кондиции, а в помещения репродуктора вводят свиноматок, хряков и выполняют технологические операции воспроизводства. Так как реализация продукции после ввода свиноматок и их осеменения до окончания откорма будет не ранее, чем через 6 месяцев (работа свинокомплекса только на ввоз), этот период также является контрольным.

В случае принятия решения об убое поросят-сентенелей на мясо, прирезку выполняют в специально обозначенном мясокомбинате или убойном пункте, имеющем холодильник на территории субъекта. Пробы селезёнок от всех поросят-сентенелей проверяют параллельно ПЦР и РПИФ и только после получения отрицательных результатов мясо и продукты убоя реализуют без ограничений. Процедуры введения животных для восстановления поголовья и выращивания выполняют без ограничений.

Документирование биологического контроля. Для документирования результатов биологического контроля составляют "Акт биологического контроля", в котором указывают основание для проведения биологического контроля (номер и дату приказа уполномоченного органа), перечень членов Комиссии и основных исполнителей, цель биологического контроля, время и место проведения и сформулированное заключение комиссии, подписи.

К акту прилагают протоколы наблюдения (температурные листы), акты отбора проб, вскрытия (если таковые имели место), результатов лабораторных исследований.

Заключение. АЧС вирус-интактные, серонегативные по-росята-сентенели в комбинации с лабораторными методами могут использоваться как биологические индикаторы, подтверждающие отсутствие вируса на ферме. При этом, уверенность в определении времени для благополучного введения свиней и выполнения дальнейших технологических процедур выращивания имеет лучшее основание, чем результаты бактериологического контроля (бактериологический контроль как индикатор качества дезинфекции также имеет высокий вес и его выполнение неукоснительно). Данные о высокой вирулентности вируса, циркулирующего в разные годы и в разных субъектах РФ [1, 2, 3] предполагают "хорошую работу метода сентенелей", так как высокая инфекционность вируса, даже после введения 1lg50 приводит к инфекции с коротким инкубационным периодом и гибели [2, 3], которая может быть легко установлена. 45 дней содержания, даже с учётом максимального инкубационного периода, указанного в Наземном Кодексе МЭБ [8] составляет 15 периодов. На самом деле, инкубационный период после инфицирования "российскими" изоля-тами 3 дня (2-4), то есть значительно короче [3], поэтому шансы для инфицирования, если имеется остаточный вирус и в минимальной концентрации, очень велики. В связи с риском "получить" вторичную вспышку АЧС при проведении биологической пробы, свинокомплексу присваивают статус "подозреваемого" и это может сдерживать введение биологического контроля в практику. С другой стороны, с учётом тех же самых аргументов, отсутствие инфекции у поросят-сентене-лей гарантирует отсутствие вируса и, таким образом, биологический контроль даёт экономическую выгоду владельцу за счёт сокращения сроков введения животных (время) и начала функционирования свинокомплекса (прибыль).

Резюме. При острой и подострой формах течения африканской чумы свиней размножение вируса в организме зараженной свиньи сопровождается экскрецией вируса во внешнюю среду.

В настоящее время подтверждение отсутствия вируса АЧС на поверхностях пола, стен, дверей кормушек, поилок, предметов или оборудования в помещениях свиноферм и свинокомплексов основано на выполнении бактериологического метода оценки качества дезинфекции, однако, реально, по результатам изоляции стафилококка, можно оценить только качество дезинфекции, и только косвенно, отрицательные результаты могут свидетельствовать о полном уничтожении вируса.

Перед отправкой партии поросят проводят термометрию, не менее 10% от количества группы, а также от всех животных отбирают по 2 пробы крови: одна - с содержанием ЭДТА, другая - без антикоагулянта (для получения сыворотки) - так называемые "нулевые" пробы. Пробы маркируют соответственно номера животного и вида исследований, например, N° 1-с (сыворотка) и N° 1-э (ЭДТА), направляют в лабораторию и хранят замороженными при минус 20°С.

При подтверждении АЧС - выполняют действия в соответствии с разделами 4, 5, 6 инструкции. При получении отрицательных результатов лабораторных исследований на АЧС биологический контроль продолжают.

Если биологическим контролем подтверждено отсутствие вируса АЧС в сроки, указанные в разделе 6 инструкции, то есть через 6 мес. или более, после отмены карантина, свиней убивают на мясо и реализуют без ограничений.

Если биологический контроль выполнен с отрицательным результатом раньше указанных 6-ти мес., - поросят-сентенелей группируют и откармливают до товарной кондиции, а в помещения репродуктора вводят свиноматок, хряков и выполняют технологические операции воспроизводства. Так как реализация продукции после ввода свиноматок и их осеменения до окончания откорма будет не ранее, чем через 6 месяцев (работа свинокомплекса только на ввоз) этот период также является контрольным.

Источник: Ветеринария Кубани