Лабораторная диагностика: Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС)

Печать

Лабораторная диагностика: Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС)

Какие методы лабораторной диагностики я использую для диагностирования РРСС? Какой из методов я выберу в зависимости от ситуации? Как интерпретировать результат?

Доступные анализы



Схема выявления вируса и антител после контакта с РРСС: Данный график показывает изменения концентрации (ось Y) во времени (ось Х) различных аналитов, используемых при анализе. После контакта с РРСС вы обнаружите вирус в крови свиней (виремия), что обычно длится примерно от 2 до 4 недель, в зависимости от возраста и иммунного статуса свиней. Сероконверсия (обнаружение антител) обычно появляется в период 7-10 дней после контакта и длится несколько месяцев, затем животное становится серонегативным. Нейтрализация антител появляется в период от 4 до 6 недель после контакта (López и Osorio, 2004).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

* Обнаруживает наличие определенной последовательности вирулентной нуклеиновой кислоты (РНК).
* Типы образцов: ткани, кровь, сыворотка, ротовые жидкости, и т.д.

Преимущества:
- Одновременное использование различных праймеров для выявления РРСС типа 1 (европейский) и типа 2 (североамериканский) в одном образце.
- Очень высокая чувствительность (может выявить малейшее количество вируса).
- Раннее выявление – острые формы заболевания должны быть положительными.
- Использование множества различных видов образцов (ткани, кровь, сыворотка, ротовые жидкости и т.д.).
Умеренная стоимость:
- Зачастую можно объединить 5 образцов сыворотки и ткани для снижения стоимости и минимизации потери чувствительности.
- Часто не объединяют ротовые жидкости из-за ожидаемых высоких пороговых значений (пониженная концентрация вируса), что может привести к существенному снижению чувствительности.

Недостатки:
* Во избежание ложно негативных результатов лаборатории должны периодически обновлять праймеры.
* Необходимо обновлять праймеры как для РРСС типа 1, так и типа 2.
* Для дифференциации вакцинного и дикого вируса необходимо секвенирование.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

* Обнаруживает наличие антител.
* Типы образцов: сыворотка и ротовые жидкости (для некоторых наборов).

Преимущества:
- Большинство наборов выявляют антитела как для РРСС типа 1, так и типа 2.
- Животные остаются положительными в течение нескольких месяцев (3-12).
- Могут использоваться при хроническом заболевании.

Недостатки:
- Выявление специфических антител и время выявления могут немного варьироваться в зависимости от доступных коммерческих наборов.
- Для того, чтобы животные стали серопозитивными требуется 7-10 дней.
- Невозможно определить разницу между материнскими антителами и контактными.
- Невозможно дифференцировать вакцинный и дикий вирус.

Иммуногистохимия (ИГХ)

* Выявляет наличие вирусного антигена
* Типы образцов: ткани

Преимущества:
- Выявляет вирус в месте поражения (хорошее доказательств причинно-следственной связи).
- Может выявить низкую, среднюю или высокую концентрацию вируса.

Недостатки:
- Необходимо предоставить корректный образец ткани.
- По сравнению с ПЦР для выявления необходимо большее количество вируса
- Оценивает только маленький образец ткани.

Генетическое секвенирование

* Секвенирует генетические нуклеиновые кислоты вируса (РНК).
* Типы образцов: ткани, кровь, сыворотка, ротовые жидкости и т.д.

Преимущества:
- Могут дифференцировать вакцинный и дикий вирус.
- Может помочь дифференцировать новый появившийся вирус от существующего или прошлых вирусов.

Недостатки:
- Дорогой.
- Обычно секвенирует только ORF5, т.е. 600 из примерно 15 000 основных пар.
- Образцы с высоким пороговым значением (> 34) сложнее секвенировать.

Таблица 1. Успешное секвенирование, основанное на методе расчета пороговых значений цикла ПЦР для РРСС из образца ротовых жидкостей. Таблица подготовлена Chris Rademacher и др. 2016.



Косвенная иммунофлюоресценция (ИФА)

* Выявляет наличие антител.
* Типы образцов: сыворотка.

Преимущества:
- Наравне с ПЦР может выступать в качестве подтверждающего теста для неожиданных положительных результатов ИФА.

Диаграмма показывает использование косвенной иммунофлюоресценции для подтверждения РРСС в образцах, неожиданно показавших положительный результат при анализе с помощью ИФА теста. Подозреваемый отрицательный образец, который при анализе ИФА дает негативный результат, считается отрицательным. Если образец неожиданно положительный, то можно провести подтверждающий тест с помощью косвенной иммунофлюоресценции. Если этот тест показывает положительный результат, то образец считается положительным. Если он отрицательный, можно считать, что это был ложно-положительный результат, а так как ПЦР также отрицателен, поэтому инфекция не подтверждается.

Недостатки:
- Невозможно для большого количества образцов.
- На результат влияет изолят вируса, использованный для анализа.
- Надежность в большой степени зависит от технических навыков.

Интерпретация результатов

ПЦР

Положительный – Вирус присутствует/циркулирует, что с высокой степени вероятности говорит о причинно-следственной связи, особенно при низких пороговых значениях и наличии клинических признаков. Недавняя вакцинация модифицированной живой вакциной может привести к положительным ПЦР результатам.

Отрицательный – отсутствие вируса или отрицательный результат при наличии вируса, если тестирование проводится по прошествии большого количества времени после заражения.

ИФА

Положительный – Материнские антитела или контакт в прошлом (обычно> 7-10 дней после контакта) с вакцинным или диким вирусом.

Отрицательный – отсутствие вируса или для выявления прошло слишком мало времени после инфицирования (обычно должно пройти 7-10 дней после контакта).

ИГХ

Положительный – вирус присутствует в месте поражения.

Отрицательный – отсутствие вируса либо отрицательный результат при наличии вируса, если тест проводится по прошествии большого количества времени после заражения.

Генетическое секвенирование

Вакцинный вирус – ожидаемая гомология - > 99%.
Дикий вирус – ожидаемая гомология снижается на 1-2% в год.

ИФА

Положительный - Материнские антитела или контакт в прошлом (обычно> 7-10 после контакта) с вакцинным или диким вирусом.

Негативный - отсутствие вируса или для выявления прошло слишком мало времени после инфицирования (обычно должно пройти 7-10 дней после контакта).

Сценарии

Аборты у свиноматок/свинок

* Абортированные плоды: Соберите 6-8 плодов и проведите общий ПЦР анализ. Только около 50% абортированных плодов будут ПЦР-положительными (поэтому необходимо провести анализ большого количества плодов), но у положительных образцов обнаружится высокая концентрация вируса, поэтому их можно объединять в группы по 10 для ПЦР анализа.

* Абортирующие свиноматки/свинки: Соберите сыворотку свиноматок/свинок, у которых недавно случился аборт (< 10 дней) для ПЦР анализа. Можно объединить в группы по 5. ИФА-анализ будет бесполезен, так как обычно для того, чтобы стать серопозитивными наивным свиноматкам/свинкам требуется 7-9 дней.

Репродуктивные проблемы у свиноматок/свинок

* Соберите 15-20 образцов от животных с репродуктивными проблемами и 15-20 от животных, у которых данные проблемы отсутствуют и протестируйте с помощью ПЦР (можно объединить 5-6 образцов) или ИФА (каждый по отдельности).

Слабые поросята при опоросе

* Можно собрать семейные ротовые жидкости от слабых поросят нескольких пометов и протестировать с помощью ПЦР.

* Можно собрать тестикулы (если кастрируются), хвосты, ткани языка (мертвые поросята) от поросят из различных пометов. Для тестирования можно объединять большое количество образцов.

* Соберите образцы сыворотки от 10 пораженных пометов отобрав 2-3 поросенка из помета и протестируйте с помощью ПЦР, объединив 5-6 поросят. Убедитесь, что поросята не вакцинировались против РРСС.

Поросята на доращивании с острыми клиническими признаками РРСС

* Соберите ротовые жидкости с 4-6 различных станков и протестируйте индивидуально с помощью ПЦР. Не объединяйте образцы для тестирования.

* Соберите 15-30 рандомных образцов сыворотки от поросят с клиническими признаками и протестируйте с помощью ПЦР. Для анализа можно объединить в группы по 5-6.

Поросята на доращивании с хроническими признаками РРСС

* Соберите ротовые жидкости с 4-6 различных станков и протестируйте индивидуально с помощью ПЦР. Не объединяйте образцы для тестирования. Можно также использовать ИФА-анализ.

* Соберите 30 рандомных образцов сыворотки от поросят с клиническими признаками и протестируйте с помощью ПЦР. Для анализа можно объединить в группы по 5-6. Для подтверждения контакта можно использовать индивидуальное тестирование образцов с помощью ИФА-анализа.


Автор: Alejandro Ramirez
Источник: pig333.ru
Печать
588
22.03.2021

Статьи партнеров

Кларенс Фрозе, Магистр наук в области сельского хозяйства, директор по кормлению, Genesus Inc. Белки состоят из ряда структурных компонентов, включая аминокислоты. Во...

29.03.2021 161

Д. Данова, специалист по техническим решениям в свиноводстве, компания «Каргилл», Восточная Европа Отличительные особенности развития российского свиноводства сегодня...

25.03.2021 192

Майк Хинрих, компания Biochem, Германия Одна из основных проблем в кормопроизводстве — загрязнение растительного сырья (в поле или при хранении) плесневыми грибами и их мета...

23.03.2021 3017

Бастиан Хильдебранд, доктор наук Компания Biochem, Германия Здоровье конечностей и целостность копытец свиноматок — важнейшие факторы, от которых зависит уровень воспроизв...

16.03.2021 322

Чад Бирман, Доктор наук, генетик, Genesus Inc. Что такое устойчивость к болезням и почему она так важна? Связанные со здоровьем свиней проблемы самым негативным образом...

14.03.2021 229

Недавно компания PIC опубликовала результаты испытаний PIC®800 – PIC®337. Genesus сравнивает эти результаты с показателями Дюроков Genesus. [ /upload/medialibrary/34d/content_im...

09.03.2021 405

Рекомендованные генетической компанией Genesus рационы кормления для откормочных свиней весом от 55 до 290 фунтов (~ 25 – 131.5 кг) в настоящее время на $14.90 US/тонну дешевле, ...

01.03.2021 312

Кристина Ю. Серенсен, Йенс Н. Йоргенсен, Animal Health & Nutrition, Chr. Hansen A/S, Дания Отъем — сложный период в жизни поросят: на целостности кишечника животн...

26.02.2021 386

Микотоксины — вторичные метаболиты, продуцируемые микроскопическими плесневыми грибами. Исследования показывают, что потребление корма, содержащего микотоксины даже в незначитель...

17.02.2021 413

Эверест Аканно, доктор наук, генетик, Genesus Inc. Конечная цель программы племенной работы при разведении свиней на уровне нуклеуса заключается в улучшении производственн...

16.02.2021 301

По материалам компании Chr. Hansen А/S (Дания). Один из наиболее эффективных способов удешевления себестоимости свинины — добавление полезных микроорганизмов в рационы живот...

28.01.2021 523