Перенос эмбрионов – это собирательный термин для технологий, используемых для трансплантации эмбрионов из матки одного женского организма в другой. Данная технология используется преимущественно у крупного рогатого скота, но очень хорошо применима и у свиней - в будущем, возможно, применение данной технологии будет иметь более широкий масштаб.
С. Л. Терлоу и Дж. Р. Добринский, Международного центр биотехнологии «Minitube», Хорив, штат Висконсин, США
Эта статья знакомит с основами трансплантации свиных эмбрионов (собирательный термин для технологий, которые в будущем могут быть более распространены в свиноводстве). После того, как яйцеклетки или "яйцо" оплодотворяется сперматозоидом, образуется зигота. В течение многих лет в центре внимания свиной промышленности был вопрос о видах трансплантации эмбрионов на ранних стадиях эмбрионального развития.
Что такое трансплантация эмбрионов?
Трансплантация эмбрионов (ЭТ) относится к области репродуктивной науки и заключается в удалении эмбрионов из матки одного женского организма (донора) и трансплантации одного или нескольких эмбрионов суррогатной самке (реципиенту). Первое потомство млекопитающих в результате трансплантации эмбрионов было воспроизведено у кроликов почти 119 лет назад! Первые поросята в результате трансплантации эмбрионов родились 27 марта 1950 года в Украине. С тех пор исследования, посвященные воспроизводству свиней, включая вопросы овуляции, оплодотворения, развития зародыша, сохранения, миграции, имплантации и выживания, явились результатом исследований, связанных с трансплантацией эмбрионов.
Трансплантация эмбрионов в настоящее время является глобальной индустрией, по данным которой, в 2005 году было произведено около 955 000 коммерческих (не для исследований) трансплантаций эмбрионов млекопитающих, 92% из которых – у крупного рогатого скота. Остальные 8%, в основном, получены у овец, коз, свиней и лошадей. Считается, что около 10000 в естественных условиях (in vivo – от животных) и более 40000 в пробирке (in vitro – полученные при проведении проектов лабораторных исследований) свиных эмбрионов трансплантируется каждый год. Основными странами, предоставляющими данные об этой деятельности в Международное Общество Трансплантации Эмбрионов, являются США, Канада, Тайвань, Корея и страны Европейского Союза.
Как осуществляется ЭТ у свиней?
Стандартный метод трансплантации эмбрионов у свиноматок, как это практиковалось в течение длительного времени посредством вентральной лапаротомии по средней линии.
Коммерческая трансплантация эмбрионов была практичной альтернативой в животноводстве в течение многих лет. У крупного рогатого скота репродуктивный тракт и размер животного позволяет проводить ректальную пальпацию половых путей, что делает возможным дальнейшее нехирургическое ректально-вагинальное трансцервикальное осаждение эмбриона в ипсилатеральном (сторона овуляции) роге матки. У свиней, в виду их меньшего размера, ограничено или запрещено проведение нехирургического ректально-вагинального трансцервикального осаждения эмбрионов. Кроме того, свинья является многоплодным животным с характерными длинными рогами матки, что необходимо для вынашивания выводка или помета поросят во время беременности. Для свиней характерно наличие именно таких длинных рогов матки, а также шейки матки, расположенной по типу «штопор», что препятствует проведению нехирургического трансцервикального сбора и осаждения эмбрионов. Таким образом, ученые и ветеринары давно используют вентральную лапаротомию по средней линии для восстановления и переноса эмбрионов в организм свиньи-реципиента.
Не является ли ЭТ избыточным для свиней?
В течение длительного времени трансплантация эмбрионов у свиноматок производилась посредством вентральной лапаротомии по средней линии.
Свиньи относятся к видам, рождающим помет. Кроме того, в отличие от крупного рогатого скота, где также широко применяется ЭТ, у свиней относительно ранний период полового созревания и короткий период беременности. Таким образом, агрессивный выбор при спаривании свиней, когда производят искусственное оплодотворение (AI), уже позволяет осуществлять генетический прогресс без необходимости проведения ET.
В таком случае, какие факторы мотивируют свиноводов продолжать реализовывать различные методы трансплантации эмбрионов? Вот некоторые из них:
Генетический прогресс
Только 50% генетического материала может быть изменено в одном поколении посредством искусственного оплодотворения, в то время как 100% генетического материала или полностью новый геном может быть введен с эмбрионом.
Расширение рынков
Свиноводство продолжает расширяться во всем мире и характеризуется появлением компаний, которые работают на международном уровне и смогут извлечь выгоду из экономически эффективных возможностей трансплантации эмбрионов вместо продажи живых животных. Это также позволит более мелких предприятиям стать более конкурентоспособными, продавая уникальные генетические образцы в виде законсервированных образцов/трансплантируемых эмбрионов.
Снижение риска для здоровья
Трансплантация эмбрионов может быть использована для преодоления проблем со здоровьем свиней. Эмбрионы могут быть удалены у свиноматок с такими заболеваниями, как псевдобешенство или свиной репродуктивный и респираторный синдром (РРСС), которые затем «отмываются» и передаются реципиенту без выявленных заболеваний для обеспечения здоровых стад. Эта уникальная характеристика ЭТ может быть использована для минимизации или устранения риска развития какого-либо заболевания между стадами и получения желаемого генетического прогресса. Данное применение ЭТ было названо «генетическим спасением».
Генетические рычаги
Использование других биотехнологий, таких как клонирование эмбрионов и криоконсервация, требуют проведение ЭТ для воспроизводства живого потомства.
Медицина
Органы свиней наиболее совместимы с человеческими из-за сходства в анатомии, физиологии и размерах. С точки зрения этики, их применение менее спорно, чем использование органов приматов. В последнее десятилетие в США количество пациентов, ожидающих трансплантации органов, увеличилось втрое. Департамент здравоохранения США и Служба защиты программы человеческого донорства имеет более 50000 заявок на трансплантацию органов. Процедура трансплантации эмбрионов является важным шагом в разработке и производстве генетически измененных свиней, органы которых подходят для трансплантации человеку. Кроме того, свинья была признана более подходящим животным для экспериментального моделирования болезней человека. Лишь 8% исследований, проведенных в США на грызунах или других стандартных моделях по воспроизведению человеческих заболеваний и дошедших до клинических испытаний, в действительности привели к созданию готового продукта для лечения человека. Уникальная физиология и анатомия свиньи делает ее более подходящей для моделирования человеческих болезней, и свинья в настоящее время активно используются для генетических манипуляций и является экспериментальной моделью по воспроизведению таких заболеваний, как атеросклероз, сахарный диабет, муковисцидоз, мышечная дистрофия, рак и другие тяжелые заболевания.
Что является основой?
Ниже приведен список технических факторов, которые будут задействованы при интеграции ЭТ с операцией, проводимой свинье.
Регулирование эстрального цикла
Для обеспечения успешного процесса ЭТ самки-доноры и реципиенты должны быть синхронизированы (для пересадки свежих эмбрионов), так что период течки у реципиентов должен проходить приблизительно в то же время, что и у доноров.
Супер-овуляция
Несмотря на то, у свиньи в период «овуляции» вовлечено от 10 до 25 яйцеклеток (за эстральный цикл), донор может быть гормонально стимулирован для того, чтобы произвести больше оплодотворенных яйцеклеток, что делает донора более продуктивным, так как процесс ЭТ предполагает удаление эмбрионов у самок-доноров. Тем не менее, супер-овуляция не является необходимой для успешного проведения ET.
Выявление половой охоты
Надежные и последовательные методы обнаружения течки и ее регистрации должны быть использованы как для доноров, так и для реципиентов, чтобы реципиенты могли быть точно согласованы с отдельными донорами и их эмбрионами.
Искусственное оплодотворение
У большинства видов ЭТ, как правило, сочетается с искусственным оплодотворением (ИО), потому что производители хотят воспользоваться скрещиванием породистых самок доноров с породистыми самцами.
Оживление и трансплантация эмбрионов
Данная технология быстро развивается, но несколько хирургических, комбинированных и нехирургических методов в настоящее время оценивается с целью определения наиболее эффективных и подходящих свинье. В настоящее время хирургическое оживление и трансплантация дают наиболее стабильные результаты.
Доноры и реципиенты
Эмбрионы, полученные у самок доноров, должны быть трансплантированы реципиентам. Доноры могут быть как по материнской, так и по отцовской линии, но материнские линии являются предпочтительными для реципиентов. Доноры и реципиенты могут быть как свинками, так и свиноматками, при этом у свинок гораздо удобнее проводить хирургические манипуляции.
Обработка и экспертиза эмбрионов
Приемлемые результаты ЭТ можно получить только тогда, когда эмбрионы надлежащим образом подготовлены к трансплантации. Обученный персонал использует стерильные приборы и среды, предназначенные для выращивания и обработки эмбрионов от момента оживления до трансплантации в контролируемых условиях.
Транспортировка эмбриона
Эмбрионы должны быть правильно идентифицированы и подготовлены для отправки по местонахождению реципиента. Транспортировка может включать перенос, перевоз или перелет из одного места в другое. Эмбрионы можно выращивать в течение 72 часов с более низкими конечными результатами.
Нехирургическая трансплантация — это относительно новая технология, разрабатываемая научными сотрудниками Университета в Мурсии
Консервирование эмбрионов
После оживления эмбрионы можно культивировать во время транспортировки, особенно если ЭТ должно произойти в течение 24 часов после оживления. Были разработаны альтернативные методы консервирования эмбрионов, включая хранение эмбрионов до 48-72 часов при низкой температуре и витрификацию эмбрионов для долгосрочной криоконсервации. В отличие от обычных методов консервирования культуры эмбрионов, в будущем именно эти технологии будут играть важную роль для реализации программы поставок при глобальной трансплантации эмбрионов.
Что такое будущее?
В настоящее время типичными результатами следует считать достижение беременности и опороса в 85% случаев трансплантации эмбрионов, а эмбриональная выживаемость (с учетом беременности реципиентов) составляет 50-55%. Сочетание этих показателей говорит о том, что трансплантация эмбрионов до 50% случаев приведет к рождению поросят. Результаты зависят от причины проведения ЭТ. Использование ЭТ с целью спасения генотипов от доноров, чье здоровье находится под угрозой, может быть менее эффективным, чем использование ЭТ для передачи генетического материала в здоровых стадах (см. Таблицу 1). Продолжительность времени культивирования может повлиять на результаты международной трансплантации. Трансплантации свиных эмбрионов, которая успешно применяется в различных областях свиноводства, показывает, что эта надежная процедура заслуживает рассмотрения. Согласно нашим экспериментальным данным, более высокий риск снижения эффективности связан с донорами и качеством эмбрионов при генетическом спасении. Практическая реализация трансплантации эмбриона требует специального помещения, оборудования и квалифицированной бригады хирургов.
Возможно ли проведение ЭТ нехирургическим методом?
В последнее десятилетие много исследований было посвящено более реальным и повторяемым нехирургическим методам трансплантации эмбрионов у свиней. Заимствование методов, применимых у других видов, ограничено, в связи с меньшими размерами животного и уникальной природой репродуктивной системы свиньи. Исследования продолжаются для того, чтобы добиться прогресса в обеспечении применения нехирургических методов ЭТ у свиней в сельскохозяйственной практике. Наиболее обнадеживающие результаты были получены при использовании катетера, разработанного в университете Мурсии доктором Эмилио Мартинесом. Показатели 70,8% опороса и 6,9 поросят из числа родившихся в помете были достигнуты с помощью катетера, который теперь доступен в центре Minitube. Постоянные усилия при проведении исследований направлены на нехирургические методы проведения ЭТ, а именно на то, чтобы данные технологии были конкурентоспособными, а методы проведения ЭТ стали более экономичным и практичным для производителей свиней.
Однако в будущем свиноводства процедура трансплантации эмбрионов станет обычным делом, это всего лишь вопрос времени. Многие глобальные рыночные силы и технологические прорывы вносят свой вклад в этот неизбежный факт. Это волнующий момент – возможность принять участие в данном начинании в сфере текущих комплексных усилий, направленных как на исследование, так и на выявление новых возможностей для производителей.
