Оценка противовирусной активности бактерий, входящих в состав препарата Проваген

270
Оценка противовирусной активности бактерий, входящих в состав препарата Проваген

В.Н. Афонюшкин, канд. биол. наук, зав. сектором молекулярной биологии, Сибирский федеральный центр агробиотехнологий Российской академии наук, Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук

А.Н. Ширшова, Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, ООО «Ветбиотест»

Д.В. Шамовская, Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, ООО «Ветбиотест»

Д.А. Пломодьялов, канд. ветеринар. наук ООО «ТрионисВет»


В своей клинической практике ветеринарные врачи регулярно сталкиваются с ситуациями, когда применение антибиотика широкого спектра действия сопровождается в последующем диарейным синдромом. Рассматривая это явление как постантибиотический дисбиоз, мы, тем не менее, нередко обнаруживали обострение различных вирусных инфекций как в кишечнике, так и в респираторной системе. Если обострение респираторных вирусных инфекций при постантибиотическом дисбиозе легко объяснялось повышением реактивности организма в ответ на изменение состава кишечной микробиоты, то накопление вирусов (реовирусов, флавивирусов и т. д.) в кишечнике заставило нас выработать гипотезу о взаимодействии вирусов и бактерий.

Для проверки гипотезы о разрушении вирусов бактериями мы изучили повреждающее действие бактерий рода Bacillus, входящих в состав препарата Проваген, в отношении вируса болезни Марека 3-го серотипа (вируса герпеса индеек).

Материалы и методы

Исследования проводились на базе лаборатории фармакогеномики Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН и сектора молекулярной биологии СФНЦА РАН.

В 450 мл фосфатно-солевого буфера (содержащего вакцинный штамм FC 126) вносили разведенный Проваген в объеме 50 мкл и титровали с шагом 1:10, получив концентрации 3,5 × 108 – 3,5 × 105 КОЕ/мл. Инкубировали при 37 °С в течение 4 часов, после чего выделяли ДНК силикосорбционным методом. Также проводили контрольные постановки без Провагена и без вируса. Все опыты выполняли в четырех повторностях. Концентрацию бактерий определяли методом последовательных разведений на Eugonic-агаре.

Наличие геномной ДНК вируса герпеса индеек выявляли с помощью ПЦР в режиме реального времени, которую проводили с SYBRGreen на амплификаторе CFX (BiRad).

Результаты исследования

Как следует из полученных данных (см. таблицу, график), в течение четырех часов инкубации активности бактерий в составе препарата Проваген недостаточно для полной инактивации вирусных частиц (вируса герпеса индеек, штамм FC 126). Однако статистически достоверно (р<0,05) повышается пороговый цикл (Сt) в ПЦР, специфичной в отношении вируса герпеса индеек. Это свидетельствует о снижении концентрации вирусной ДНК в культуральной жидкости.


Мы можем утверждать, что в составе препарата Проваген есть микроорганизмы, способные разрушать герпес-вирусы. Для полной инактивации вирусов и их генетического материала требуется более длительная экспозиция или более высокая концентрация бактерий.

Заключение

Бактерии, входящие в состав препарата Проваген, способны снижать концентрацию вируса болезни Марека, что дает основание рекомендовать его распыление в птичниках по завершении дезинфекции.