Введение
Защита от инфекции Mycoplasma hyopneumoniae (Mh) опосредована как гуморальной, так и клеточной составляющей иммунной системы, с акцентом на последнюю. Таким образом, для эффективной Mh вакцины, критичным аспектом является индуцирование у свиней клеточно-опосредованного иммунного ответа (англ. CMI) в дополнение к ответной реакции посредством антител. Различные адъюванты могут управлять иммунной системой стимулируя Th1 (клеточно-опосредованный) или Th2 (посредством антител) иммунный ответ, который может быть выявлен при помощи клеточных или серологических анализов, соответственно. В данном исследовании мы показали важность оптимизации адъюванта посредством представления результатов клеточных и серологических исследований образцов крови, полученных от свиней, иммунизированных экспериментальными Mh вакцинами. Эти вакцины включают неоптимизированные и оптимизированные составы адъювантов, соответственно. Оптимизированная формула адъюванта была использована в коммерческой вакцине ХИОГЕН® (Hyogen®) .
Материалы и методы
Три группы по 10 поросят каждая, серонегативные против Mh, были иммунизированы однократно в возрасте 3 недель (D21) с использованием вакцин (адъювантов), приведённых в Таблице 1. Содержание антигена в вакцинах, использованных для иммунизации Групп 2 и 3, было постоянным, поскольку адъюванты состояли из различных количеств нетоксичных липополисахаридов (англ. LPS), полученных из E. coli, J5, в масляно-водной эмульсии. Содержание масла в вакцинах также варьировало.
Таблица 1. Состав вакцин
|
Группа |
Mh антиген |
Адъювант |
|
Контроль (Ctr) |
- |
неоптимизированный |
|
2 |
+ |
неоптимизированный |
|
3 |
+ |
оптимизированный |
На 40 день (D40) половина каждой группы была подвергнута реакции гиперчувствительности замедленного типа (англ. DTH) с применением внутрикожной инъекции очищенного Mh антигена. Фитогемагглютинин (англ. PHA) был использован в качестве позитивного контроля. Утолщение кожи было измерено при помощи цифрового толщиномера, реагирующего на давление (Mitutoyo, Japan). На 40 день (D40) от второй половины каждой группы были отобраны образцы крови для исследования на интерферон-γ (IFNγ) (в ELISPOT ) и наличие антител (в ИФА, англ. ELISA). Для количественного анализа секреции антиген-специфичных цитокинов, вырабатываемых in vitro стимулированными Т-лимфоцитами были использованы: диагностический набор ELISPOT для выявления IFNγ свиней (R&D, USA) и ELISPOT ридер (CTL, USA). Титр Mh-специфичных сывороточных антител был определён с использованием непрямого ИФА метода, разработанного в нашей лаборатории.
Результаты
Рисунок 1. Гуморальный и клеточный иммунные ответы у вакцинированных свиней
Заключение и Обсуждение
В этом исследовании мы показали влияние адъюванта в различных комбинациях вакцин на клеточный иммунный ответ и титр сывороточных антител, измеренных методами DTH, IFNγ ELISPOT и количественного ИФА, соответственно. Оптимизированный масляно-водный состав комбинировался с соответствующим количеством адъюванта (включающего нетоксичные LPS). В результате (после однократной инъекции) привело к сильной стимуляции как клеточной, так и гуморальной составляющих иммунной системы у серонегативных животных.