Сравнение серологических методов лабораторной диагностики лейкоза КРС

Печать

Сравнение серологических методов лабораторной диагностики лейкоза КРС

Михайлова Вера Владимировна1, Лобова Татьяна Петровна2, Скворцова Анастасия Николаевна3, Шишкина Мария Сергеевна4, Глушакова Наталья Анатольевна5

1. заведующая отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: cnmvl@сnmvl.ru.
2. старший научный сотрудник отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: t.lobova@mail.ru.
3. младший научный сотрудник отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: nefedovi5748@gmail.com.
4. младший научный сотрудник отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: M.belyaeva@rambler.ru.
5. технический директор ВерумБио, email: cto@verumbio.ru.

Хотите получить скидку 5% на продукцию компании IDEXX? 
Звоните по телефонам: +7 (800) 500 3585 или +7 (495) 120 7787 и назовите код скидки – ВЕРУМБИО321 KM
Акция действительна до 30 июня 2021 года.


Аннотация

В данной статье представлена сравнительная характеристика серологических методов лабораторной диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота. Была проведена оценка нескольких коммерческих тест – систем ИФА по критериям специфичности, чувствительности и воспроизводимости с использованием референтных образцов, соответствующих стандартам OIE (МЭБ).

Введение

Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) до сих пор является актуальной проблемой в молочном скотоводстве. Ущерб, наносимый заболеванием, обусловлен не только гибелью высокопродуктивных животных и утилизацией туш с генерализованными поражениями, затратами на лабораторные исследования, мероприятия по профилактике и ликвидации этого заболевания, но и достаточно высокими экономическими потерями в племенной работе. Помимо этого, сокращаются эксплуатационные сроки КРС, падают удои, качество молока, растет себестоимость продукции [1].

По требованиям Международного эпизоотического бюро, инфицированные вирусом лейкоза и гематологически больные животные, молоко, мясо и другие продукты убоя полученные от них, не могут находится в обороте и использоваться для пищевых целей на территории Таможенного союза и стран - участниц ВТО.

В настоящее время еще не разработано специфической профилактики против ВЛКРС [2]. Поэтому необходимо в краткие сроки выявлять заболевших животных, а также вирусоносителей, для того чтобы эффективно проводить противолейкозные мероприятия.

На сегодняшний день в лабораторной практике наиболее распространенным методом диагностики ВЛКРС является РИД – эта реакция основана на обнаружении в сыворотке крови специфических преципитирующих АТ, которые появляются в крови через 2-8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно. Реакция иммунодиффузии имеет свои преимущества: обладает достаточно высокой специфичностью и небольшой стоимостью реагентов, но она же имеет и ряд недостатков:

- более низкая чувствительность в сравнении с ИФА (т.е. возможны пропуски положительных животных) [4];
- визуальный учет результатов (возможна субъективная оценка);
- учет результатов только через 48 часов после постановки реакции.

В настоящий момент, кроме реакции иммунодиффузии наиболее часто используется метод непрямого ИФА. Метод основан на связывании специфических к вирусу лейкоза АТ с АГ ВЛКРС, комплекс АТ-АГ выявляется с помощью видоспецифических антител, меченых пероксидазой хрена, с последующим ферментативным превращением бесцветного субстрата в окрашенный продукт [3]. Результат можно получить в течении нескольких часов, оценка результатов осуществляется с помощью спектрометрического оборудования. Положительные результаты серологических исследований на обнаружение антител к ВЛКРС (ИФА, РИД) достаточны, для того чтобы стадо получило статус инфицированного вирусом лейкоза, но не стоит исключать гематологические исследования для выявления стадии клинического поражения крови при данном заболевании.

Материалы и методы

На базе ФГБУ ЦНМВЛ были проведены сличительные испытания трех коммерческих наборов ИФА, которые предназначены для выявления ВЛКРС: Leukosis serum screening Ab test Kit (IDEXX), ID Screen BLV Competition (IDvet), Набора для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Вариант 2) VeriTest (ООО «Ветбиохим») и Набора для серологической диагностики лейкоза КРС методом РИД (ФКП Курская Биофабрика, БИОК). Испытания были проведены и проанализированы в соответствии с инструкциями производителей. В качестве исследуемого материала для оценки чувствительности использовали референтную сыворотку Enzootic Bovine Leukosis (EBL) OIE Reference Serum E05. Для оценки специфичности была использована стандартная эмбриональная телячья сыворотка Hyclone (US Origin).

Для тестирования были использованы в пяти повторах разведения сыворотки Enzootic Bovine Leukosis (EBL) OIE Reference Serum E05: 1:10 (Европейский Союз требует обнаружения антител в стандартной сыворотке E05 в разведении 1/10 только после этого тест - системы могут быть лицензированы для диагностических целей (Всемирная Ассамблея МЭБ, 2016)), 1:100, и 1:1000.

Были получены следующие результаты:

Таблица №1



Выводы

Как мы видим, из таблицы №1 при исследовании цельного референтного контроля Enzootic Bovine Leu-kosis (EBL) OIE Reference Serum E05, все наборы ИФА и РИД дали положительный результат. При разведении в соотношении 10-1 наборы IDEXX, «Ветбиохим» и РИД, дали положительный результат. В 1 пробе при использовании набора IDVet был получен отрицательный результат, что и сказалось на повышении коэффициента вариации. Но уже при разведении референтного контроля в соотношении 1:100, положительный результат при исследовании всех образцов был получен только на наборе IDEXX, у набора IDvet была 1 сомнительная проба; при исследовании методом РИД было получено 2 отрицательных и 3 сомнительных результата, набор производства «Ветбиохим» – показал отрицательные результаты по всем исследуемым образцам. 

Из выше перечисленного можно сделать вывод, что при исследовании набором производства IDEXX, который обладает более высокой чувствительностью, выявление животных, имеющих антитела к ВЛКРС  будет осуществляться в гораздо более ранние сроки после заражения. 

При исследовании фетальной сыворотки Hyclone в пяти повторах, все используемые в опыте тест – системы дали отрицательный результат, что свидетельствует о высоком уровне специфичности данных наборов. 

Из сказанного выше можно сделать вывод, что при выявлении антител к ВЛКРС, наиболее чувствительной коммерческой тест – системой оказалась IDEXX Leukosis serum screening Ab test Kit. Для выбора метода исследования необходимо руководствоваться в первую очередь чувствительностью и специфичностью тест-систем, так как оздоровление поголовья КРС от лейкоза является одной из приоритетных государственных программ. Нужно улучшать ресурсы лабораторий, их оснащенность оборудованием и квалификацию специалистов. Но, необходимо обязательно учитывать и результаты гематологических исследований, серологически положительно реагирующих животных, чтобы дать достоверную оценку статуса стада и своевременно выявлять наличие заболевания.


Список используемой литературы

1. Fenner, F., E. J. Dubovi and N. J. Maclachlan.// Fenner's Veterinary Virolo-gy. 4th ed.Academic-2011-С.264.
2. Sabrina M. Rodríguez,1 Arnaud Florins,2 Nicolas Gillet,1 Alix de Brogniez,2 María Teresa Sánchez-Alcaraz,2 Mathieu Boxus,2 Fanny Boulanger,1 Gerónimo Gutiérrez,3 Karina Trono,3 Irene Alvarez,3 Lucas Vagnoni,3 and Luc Willems1,2,* //Preventive and Therapeutic Strategies for Bovine Leukemia Virus: Lessons for HTLV// Viruses. 2011 Jul; 3(7): 1210–1248.
3. Руководитель Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации М.В. КРАВЧУК 23 августа 2000 г. № 13-7-2/2130 МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.
4. Martin D., Arjona A., Soto I., Barquero N., Viana M., Gómez-Lucia E.: Compara-tive study of PCR as a direct assay and ELISA and AGID as indirect assays for the detection of bovine leukaemia virus. J Vet Med B 2001,48, 97–106.

Печать
1827
07.05.2021

Статьи партнеров

Чуньянь Жанг, доктор наук, генетик, Genesus Inc. Основная цель компании, занимающейся разведением племенного поголовья, состоит в предоставлении свиней, чей генетический п...

07.06.2021 78

Д-р Бернхард Ландвер, старший специалист по кормлению компании Biochem Бетаин (триметиглицин) обычно используется в качестве альтернативного донора метильных групп для зам...

24.05.2021 7731

Автор: Потапов Иван, технический специалист по свиноводству, Каргилл Тепловой стресс оказывает негативное влияние на показатели промышленного животноводства и отрицательно с...

21.05.2021 299

Престартер NEOPIGG® UNI — надежный и выгодный продукт для раннего кормления с 4 по 42 дни жизни. «На поросятах нельзя экономить», — говорят опытные свиноводы. И это действит...

18.05.2021 334

Д. Орлов, специалист по техническим решениям в свиноводстве, компания «Каргилл» (Восточная Европа) Для получения максимальной прибыли производителям свинины необходимо уме...

13.05.2021 421

Специалистам свинокомплексов, в условиях конкурентного рынка, приходится сегодня решать одновременно множество задач. Улучшение генетического потенциала, повышение рентабельности...

26.04.2021 569

В последнее время отмечается рост смертности свиноматок, при этом средние уровни в большинстве стран уже достигли двузначных цифр. Обратите внимание, это средние цифры, значит, е...

25.04.2021 653

Динеш Теккот, Доктор наук, Genesus Inc. В первой части этой статьи мы обсуждали экономический аспект сохранности поросят до отъема (PWM), а во второй части описывались разли...

22.04.2021 697

Саймон Грей, генеральный директор Genesus Россия, страны СНГ и ЕС   Кто сказал, что автомобиль, работающий на бензине, можно заправлять дизельным топливом?!! Но к...

12.04.2021 625

Кларенс Фрозе, Магистр наук в области сельского хозяйства, директор по кормлению, Genesus Inc. Белки состоят из ряда структурных компонентов, включая аминокислоты. Во...

29.03.2021 494

Д. Данова, специалист по техническим решениям в свиноводстве, компания «Каргилл», Восточная Европа Отличительные особенности развития российского свиноводства сегодня...

25.03.2021 507