Методики отбора (взятия) крови у свиней

В.В. Пругло, к.в.н., Руководитель отдела технического сервиса ООО «Сева СА», Россия

С.В. Палазюк, к.в.н., Главный ветеринарный врач ООО «ПсковАгроИнвест»

А.Н. Гречухин, к.в.н, Член экспертно-консультационного совета при НСС

1.   Необходимый инструментарий:

1. Иглы (зависят от возраста/размера):      

- до 10 кг ЖМ: 25-20G 16/25 мм;

- до 45 кг ЖМ: 18G 38 мм;

- до 100 кг ЖМ: 18G 38 мм

- свиноматки/хряки: 16G 100 мм

2. Шприцы:  2, 10, 30 мл или Вакуумные пробирки: 7-10 мл

3. Этиловый спирт, ватные тампоны, скальпель, петля/верёвка для фиксации,

4. Два человека (с мозгами и руками)

2.     Выбор места отбора и методики

 Таблица 1

3.   Методики

3.1. Методика взятия крови из ушных вен

Крайние ушные вены, одни из немногих вен, легко обнаруживаемых у свиней любого возраста и размера.  Как правило,видны три вены. Обычно наиболее крупными являются - латеральная (боковая) или центральная вены. Ушные вены представляют собой ответвления каудальной ушной и поверхностной шейной вены. Их рельеф, анастомозы и относительные размеры варьируют от животного к животному.

 
 Взятие крови из вены уха. Рисунок 1

На рисунке 1 – поросёнок, весом около 7 кг. Ассистент фиксирует животное, одновременно зажимая вену у основания уха. Фото иллюстрирует использование иглы калибра 22G. Иногда процессу отбора крови может способствовать осторожное подкачивающее нажатие пальцем на сосуд.

Свиньи имеют незначительное количество функциональных потовых желёз и не способны активно потеть. Именно поэтому циркуляция крови в сосудах уха очень важна для регуляции температуры тела. При повышенной температуре окружающей среды ушные вены будут расширены и кровенаполнены, что значительно облегчает процесс отбора крови.

После пункции вены, выделяющаяся кровь может быть сразу собрана в соответствующий сосуд под воздействием капиллярного эффекта. Такая методика подходит для измерения гематокрита и уровня гемоглобина, а также получения мазков крови. Пробирки, используемые при отборе крови для оценки гематокрита, должны быть покрыты антикоагулянтом. Пробирки, используемые для измерения гемоглобина (20 мкл) не обрабатываются подобным способом. Поэтому, сразу после отбора в кровь необходимо добавить раствор-антикоагулянт, препятствующий её свёртыванию.

Отбор крови из ушных вен иногда выполняют с использованием скальпеля: разрезом сосуда и сбором крови в открытую пробирку, однако данная методика не рекомендуется к практическому применению.

Через ушные вены можно выполнять внутривенные инъекции даже у новорождённых поросят. Животное фиксируется также, как и в предыдущем случае. Для маленьких поросят используются очень тонкие иглы, калибра 25G. Поросёнка на  рисунке  2 несколько крупнее. В этом случае используется игла калибра 23G. Вены – тонкостенные сосуды и легко перфорируются. Поэтому рекомендуется подсоединять шприц к игле до начала пункции, а оператор должен попытаться аккуратно аспирировать кровь после прокола вены. Рекомендуется начинать инъецирование спериферической  части вены, поскольку в случае неудачной попытки остаётся возможность повторной пункции/инъекции на участке, расположенном ближе к голове.

Игла и ухо фиксируются между большим и указательным пальцем оператора. Когда эта операция выполнена, ассистент может прекратить сжимание/наполнение вены и с этого момента начинается инъекция.Практически, инъецирование должно быть выполнено относительно быстро и поэтому количество вводимого раствора/препарата несколько лимитировано.

 
Введение раствора в ушную вену. Рисунок 2

В продаже имеются устройства для вливания в малые вены  (внутривенной инъекции), состоящие из трубочки, соединённой с иглой ( рис.3). Эти «иглы-бабочки» предназначены для стандартной венепункции, снабжены гибкими прозрачными соединительными трубками и прикрепляются к коже с использованием липкой ленты. Крылышки обеспечивают удобное крепление системы, и часто имеют цветную маркировку в зависимости от размера инъекционной иглы. Их важнейшим преимуществом является гибкость соединительной трубочки и возможность фиксации иглы на участке инъекции. Доступны наборы различных размеров/калибров: 19-21G.

 
Устройство для вливания в малые вены  Рисунок 3
 
Для облегчения взятия крови или внутривенной инъекции можно использовать предварительное внутримышечное введение седативного средства. Подобные препараты (например, «Ветранквил») облегчают процесс, вызывая расширение и повышая доступность периферических кровеносных сосудов. Использование катетера(например, Braunule, 18G).  со стилетом облегчает внутривенное введение и при фиксации гарантирует нахождение иглы в вене, даже если свинья активно двигает головой.  Для убойных животных и молодых свиноматок подходит калибр 18G. Для более крупных животных (свиноматки, хряки) может быть использован калибр 16G. Последний размер также может быть рекомендован для больных животных при необходимости введения больших объёмов жидкости/препаратов.

3.2. Методика взятия крови у взрослых животных и подсвинков

Образцы крови от взрослых свиней чаще всего отбирают из поверхностной яремной вены. Животное должно быть зафиксировано верёвкой, или фиксатором за верхнюю челюсть,а шея вытянута вверх. При этом желательно, чтобы животное стояло на всех четырёх конечностях. Верёвка затягивается, с таким расчётом, чтобы она не соскальзывала и не перемещалась по направлению к носовому хрящу, поскольку сдавливание этой области некомфортно для свиней.  Животное будет пытаться двигаться назад и  затянет верёвку в достаточной степени. Такимобразом, после затягивания петли нет необходимости блокировать движение свиньи вперёд( рис.4). 

 
Фиксация подсвинка за верхнюю челюсть Рисунок 4

Постановка и удержание животного в правильной позиции являются важными элементами быстрого и лёгкого отбора образца крови. При достаточном практическом навыке специалиста процедура не занимает более 1-2 минут.

Поверхностная яремная вена пролегает на глубине 25-40 мм от поверхности кожи. Правильная область венопункции (прокола вены), находится приблизительно в 120 мм выше точки плечевого сустава и расположена в самой глубокой точка яремного жёлоба, сформированного медиальной грудино-головной (sternocephalic) и латеральной плечеголовной (brachiocephalic) мышцами (рис.5). На рисунке 5эта область помечена(крупный план, сбоку) чёрной точкой.Игла должна быть направлена каудо-дорсально и в этом случае – перпендикулярно коже. Оператору-правше, как правило, удобнее проводить пункцию правой яремной вены.

Игла вводится на всю длину и к иглодержателю присоединяется вакуумная пробирка. Жировая ткань, лежащая поверх вены, должна быть слегка прижата. При попадании иглы в вену кровь начнёт поступать в пробирку. На рисунке 6 вакуумная пробирка с иглой удерживается только указательным пальцем оператора для наилучшей демонстрации методики отбора. В действительности игла с пробиркой должны быть зафиксированы более крепко.


Место пункции при взятии крови из яремной вены Рисунок 5

 
Взятие крови из яремной вены Рисунок 6


При необходимости смены вакуумной пробирки необходимо крепко удерживать иглодержатель. Оператор удерживает иглодержатель левой рукой, одновременно осторожно надавливая   на шею свиньи. Правая рука используется для смены пробирки.Подобная методика также используется для отбора образцов крови у подсвинков массой 20-50 кг. На рисунке 6 показана процедура у животного массой около 40 кг.

Настоятельно рекомендуется не перемещать иглу из стороны в сторону после введения в ткани, поскольку это может привести к серьёзным повреждениям сосудов, кровотечению и смерти (у поросят). При неправильном введении иглы или потере сосуда, рекомендуется:

- отсоединить вакуумную пробирку;

- вынуть иглу из тканей

- ввести иглу в ткани под другим углом

-  подсоединить вакуумную пробирку
 

3.3. Методика взятия крови у поросят (до 20 кг)

 
Грудное венозное сплетение, сформированное из: верхней полой, внутренней ярёмной,наружной ярёмной, общей ярёмной, плечеголовной, подмышечной, и внутренней грудной вен. Рисунок 7

У поросят массой менее 20 кг рекомендуется отбирать кровь более каудально и медиально в яремном жёлобе, ближе к рукоятке грудины (лат. manubriumsterni, манубриум). В зависимости от участка пункции(прокола), угла и глубины введения иглы, кровь будет отобрана из какого-либо кровеносного сосуда, показанного на рисунке 7. Трудно сказать из какого именно. Ассистент может удерживать поросят до 20 кг за конечности: необходимо зафиксировать передние ноги и голову. Манубриум (рукоятка) грудины и точка/направление укола показаны черным (рис.8,9).

 
                        Рисунок 8                                           Рисунок  9
                                             Взятие крови из грудного венозного сплетения
 
Качественная фиксация животного является важным элементом процедуры. Желательно избегать искривления позвоночного столба поросёнка, а также не допускать избыточного вытягивания шеи и запрокидывания головы.Подобные деформации препятствуют дыханию, ведут к смещению/сдавливанию кровеносных сосудов и затрудняют отбор крови.

Для поросят группы подсоса/доращивания (до 20 кг)можно использовать шприц и иглу. Игла присоединяется к шприцу и шприц заполняется антикоагулянтом (например, 3% раствором лимоннокислого натрия на физрастворе). Для новорожденных поросят используются иглы калибра 23G, для более крупных – 22G. После введения иглы под кожу, оператор осторожно аспирирует (создаёт отрицательное давление в шприце) вытягивая поршень. Кровь должна начать поступать после введения иглы на 10-25 мм. После того как кровь начала поступать через иглу необходимо крепко удерживать шприц, избегая дальнейшего движения. Для опоры иглы оператор может упереть свою руку в тело поросёнка, как показано на рисунке 9.  

3.4.  Методика взятия крови из хвостовой вены

Медиальная хвостовая вена лежит в подхвостовом жёлобе, близко к артерии. Оператор поднимает хвост одной рукой и прокалывает вену другой. Обычно используются иглы калибра 20G и вакуумные пробирки. Областью пункции является первый,свободно двигающийся хвостовой сустав, расположенный около пятого хвостового позвонка.  У взрослых свиней игла вводится под углом в 45° к коже. У более мелких животных рекомендуется удерживать хвост почти горизонтально, а иглу вводить параллельно коже. 


Взятие крови из медиальной каудальной вены Рисунок 10

На рисунке 10 показан отбор крови из медиальной каудальной вены. Даже у крупных животных трудно получать большие объёмы венозной крови. Но поскольку артерия пролегает очень близко к вене,часто при этом способе отбирается артериальная кровь.Впрочем, как правило, это не несёт угрозы здоровью животного. 

3.5 Методика взятия крови из орбитального (глазного) венозного синуса.

Методика взятия крови из орбитального венозного синуса оптимальна для получения образцов у новорожденных поросят (рис. 11,12). Впрочем, подобная методика также применима у животных любого возраста.

При этом методе иглу 18-19G через третье веко направляют к носовой перегородке сверху вниз до упора в кость орбиты глаза. Затем слегка оттягивают назад и набирают нужное количество крови.
 
Иногда в практике используются другие методики отбора, например, из молочной или других вен. Выбор места пункции или внутривенной инфузии остаётся на усмотрение ветеринарного специалиста.

 
 Введение иглы со стороны внутреннего угла глаза Рисунок 11

 
 Взятие крови из глазного венозного синуса  Рисунок 12 

3.6.  Получение сыворотки крови

После взятия крови у свиней, полученная кровь очень быстро сворачивается. Поэтому для получения качественной сыворотки желательно соблюдать ряд простых условий:

1. Кровь собирают в чистые (в идеале – стерильные) пробирки. Чем чище произведён отбор, тем дольше можно хранить образец и ниже вероятность неспецифических реакций. Удобным вариантом является взятие крови в специализированные вакуумные пробирки с коагулянтом.

2. Отобранные образцы крови выдерживают при комнатной температуре на 1-2 часа или помещают в баночку с тёплой водой на 30 минут. Чистой (стерильной) спицей или иглой отделяют сгусток от стенок пробирки и помещают пробирку с материалом в холодильник (4ºС)для лучшей ретракции (сжатия) кровяного сгустка

3. Через несколько часов (ночь хранения) можно отделить сыворотку, отобрав/слив в отдельную пробирку.

4.  Объем образца сыворотки должен составлять не менее 2 мл.

4.       Литература

1.       http://www.thepigsite.com/pighealth/article/550/blood-sampling-methods-available

2.       http://oslovet.norecopa.no/teaching/pig/pigbleed/

3.       http://faculty.clintoncc.suny.edu/faculty/Michael.Gregory/files/BioLaboratory/FetalPig/Anterior_blood_vessels_5.jpg