Портал промышленного свиноводства
Эл № ФС77-38706 от 25.01.10г. Роскомнадзор

Статьи по ветеринарии кур на Picainfo | Обсуждение достижений в борьбе с болезнью Марека на Конференции ветеринаров в США

Новые разработки в борьбе с болезнью Марека (БМ) обсуждались в птицеводческой секции последней конференции Американской ассоциации ветеринаров (AVMA), проходившей в Чикаго в июле 2013 года.

Экспрессия микроРНК вируса болезни Марека MDV1-miR-M4 повышает восприимчивость цыплят к сальмонеллезному энтериту.

Как сообщил Робин У. Морган (Robin W. Morgan), сотрудник Университета штата Делавэр, микроРНК (миРНК) — это короткие молекулы РНК, которые могут регулировать экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. По его словам, рядом с геном meq располагаются несколько микоРНК вируса серотипа 1 болезни Марека (MDV1), среди которых наибольший интерес вызывает MDV1-miR-M4.

Во-первых, наличие MDV1-miR-M4 является обязательным, но не достаточным фактором онкогенности само по себе. Во-вторых, MDV1-miR-M4 имеет общую исходную последовательность с miR-155 — микроРНК, влияющей на развитие и регуляцию иммунной системы. В-третьих, экспрессия MDV1-miR-M4 взаимосвязана с вирулентностью штаммов вируса MDV1. Наконец, для цыплят, привитых рекомбинантным герпесвирусом индеек (ВГИ), который экспрессирует MDV1-miR-M4 (rHVT-M4), характерна повышенная вирусная нагрузка в периферической крови по сравнению с цыплятами, привитыми исходным ВГИ.

На основании этого Морган и его коллеги предположили, что одна из функций микроРНК MDV1-miR-M4 заключается в создании условий для развития инфекции путем подавления иммунологической реактивности. Для того чтобы проверить это, они вводили беспатогенным эмбрионам в возрасте 18 дней вакцины с микроРНК исходного ВГИ, rHVT-M4, rHVT-meqmiR (экспрессирует весь кластер генов meq микроРНК miR) или разбавленные препараты. Затем после вылупления половине цыплят в каждой группе ввели коммерческую вакцину Salmune®, а неделю спустя всех цыплят подвергли воздействию возбудителя сальмонеллезного энтерита (СЭ).

Устойчивость к СЭ определялась путем подсчета количества цыплят в каждой группе, из селезенок которых смогли выделить возбудителя СЭ через неделю после заражения.

Результаты исследований, проведенных группой сотрудников Университета штата Делавэр, показали, что восприимчивость к возбудителю СЭ у цыплят, вакцинированных rHVT-M4, оказалась выше, чем у цыплят, вакцинированных исходным ВГИ. Цыплята, которым вводили вакцину с rHVT-meqmiR, также имели более высокую восприимчивость к СЭ, чем птенцы, вакцинированные исходным ВГИ.

Эти исследования позволили ученым сделать вывод о том, что микроРНК MDV1-miR-M4 участвует в иммуносупрессии, демонстрируемой штаммами MDV1, и усиливает вирулентность MDV1.

Оценка иммуносупрессии, вызываемой вирусом болезни Марека: действие патотипа вируса БМ

По словам Ника Фэйза (Nick Faiz), сотрудника Университета штата Северная Каролина, в течение последних 50 лет вирулентность вируса MDV (болезни Марека) непрерывно возрастала. Высоковирулентные штаммы MDV не только способны «преодолеть» защиту, обеспечиваемую вакцинами против БМ, но также оказывают более сильное иммуносупрессивное воздействие.

Недавно учеными была разработана модель для изучения иммуносупрессии, вызываемой вирусом БМ (MDV-IS), в лабораторных условиях. В этой модели MDV-IS измеряется косвенно, путем оценки сниженной эффективности вакцин против ларинготрахеита (ЛТ), выращенных на куриных эмбрионах (ВКЭ), против заражения вирулентным ЛТ (модель для вакцины против ЛТ).

При помощи этой модели они доказали, что заражение вирусом БМ при вылупливании создает риск для защиты, обеспечиваемой ВКЭ вакциной против ЛТ, у коммерческих мясных цыплят, имеющих материнские антитела против MDV. Более того, вакцины против БМ были не всегда эффективны в контроле MDV-IS.

Задачи их исследования были связаны с тем, чтобы подтвердить первоначальные открытия, определить, могут ли вакцины против МБ быть иммуносупрессивными, а также установить, влияет ли патотип на MDV-IS. Один эксперимент был проведен для подтверждения роли вакцин в MDV-IS. Полученные нами результаты доказали, что вакцины против БМ не всегда обеспечивали защиту от MDV-IS, вызываемой высоковирулентным штаммом vv+MDV 648A. Кроме того, ни одна из оценивавшихся вакцин не была способна вызывать имунносупрессию сама по себе.

Другой эксперимент был направлен на оценку роли патотипа вируса БМ. Определялась способность к иммуносупрессии трех штаммов MDV (GA, Md5 и 648A), относящихся к различным патотипам (вирулентный, высоковирулентный и гипервирулентный со знаком «плюс»). Результаты будут обсуждаться.

Значение вакцинации против ВГИ на эмбриональной стадии развития (in ovo) для формирования иммунной системы цыплят

Изабель Джимено (Isabel Gimeno), сотрудница Университета штата Северная Каролина, сообщила, что вакцинация in ovo против ВГИ оказалась очень эффективным средством защиты против заражения вирусом БМ в раннем возрасте. В работе, написанной в соавторстве с сотрудниками Лаборатории ветеринарии и экспериментальной патологии «Пфайзер» (Pfizer), Университет штата Северная Каролина, она объяснила, что у цыплят иммунная компетентность полностью формируется через одну-две недели после вылупливания, поэтому вакцина вводится им на эмбриональном этапе развития, когда иммунная система не сформирована.

Иммунные реакции эмбриона основаны главным образом на врожденной иммунной реакции и материнских антителах, поскольку они не подвержены действию экзогенных антигенов. Воздействие ВГИ in ovo может вызвать адаптивную иммунную реакцию.

Недавно исследователи показали, что после вакцинации против ВГИ in ovo у птенцов в возрасте четырех дней наблюдалось повышенное количество активированных Т-клеток.

Ученые предположили, что вакцинация против ВГИ in ovo усиливает иммунную компетентность цыплят при вылуплении. Данное исследование было направлено на оценку влияния вакцинации эмбрионов в возрасте 18 дней на развитие иммунной системы цыплят.

Различные иммунологические параметры (экспрессия MHC-I и MHC-II, фенотип иммунных клеток, экспрессия генов цитокинов и иммунные реакции на разные антигены) оценивались у цыплят в возрасте одного дня (вакцинированных и ложно вакцинированных против ВГИ на 18 день эмбрионального развития) и у цыплят в возрасте 7 и 14 дней (невакцинированных).

Итоги обсуждались на конференции.

Положительная корреляция между скоростью репликации и патотипом штаммов вируса болезни Марека у серонегативных цыплят

Представитель Лаборатории по изучению инфекционных и онкологических заболеваний птиц Службы сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США Джон Данн (John Dunn) рассказал, что определение патотипа новых полевых штаммов MDV — длительный процесс, требующий большого количества птицы. Подтверждение положительной корреляции между репликацией вируса и патотипом может привести к появлению более быстрых и дешевых альтернативных методов определения патотипа либо рассматриваться как предварительный анализ для отбора штаммов, патотип которых нужно определить. В ходе прошлых исследований были обнаружены различия в между отобранными вирулентным и высоковирулентным со знаком «плюс» штаммами MDV, но оценка этой корреляции с использованием широкой выборки вирусных штаммов не проводилась.

Результаты первого эксперимента, в ходе которого оценивались по пять штаммов вируса каждого вирулентного патотипа (вирулентный, высоковирулентный и высоковирулентный «плюс») с использованием серопозитивных цыплят, показали незначительное различие между группами с точки зрения характера атрофии лимфатической ткани и средние различия по скорости репликации по патотипам.

Настоящее исследование определяет различия на материале серонегативных цыплят.

Установлено существенное повышение вирусной нагрузки в тканях мозга, фабрициевой сумки и легких у цыплят на 9 и 11 дни после заражения для высоковирулентного и высоковирулентного «плюс» штаммов MDV по сравнению с вирулентными штаммами MDV. Каких-либо существенных различий между высоковирулентным и высоковирулентным «плюс» штаммами MDV не наблюдалось. Аналогичные результаты были получены при сравнении характера атрофии лимфатических тканей между группами патотипов.

Опираясь на эти сведения, Данн предположил, что существует возможность определения пороговой скорости репликации как предварительного фильтра для отделения вирулентного полевого штамма MDV от высоковирулентного/высоковирулентного плюс штаммов.

Иммунная реакция, формирующаяся у куриных эмбрионов после введения им различных типов вакцин против болезни Марека в возрасте 18 дней

Вакцинация in ovo против болезни Марека стала обычной практикой в птицеводстве. Как отметил в своем докладе Арун Кумар Пандири (Arun Kumar Pandiri), сотрудник «Экспериментал Патолоджи Лабораториз, Инк.» (Experimental Pathology Laboratories, Inc), патогенез герпесвируса индеек (ВГИ) в эмбриональных тканях был тщательно изучен, однако, несмотря на выявление положительного действия на формирование защиты, имеется мало данных о патогенезе серотипа 1 в эмбриональных тканях и вызываемой иммунной реакции.

В исследовании, проведенном им совместно с коллегами из Университета штата Северная Каролина, куриным эмбрионам в возрасте 18 дней внутриамниотически были введены вакцина против ВГИ, бивалентная вакцина (против ВГИ и SB-1) и вакцинальный штамм CVI988.

Репликация вакцинального вируса, рецепторов и экспрессия цитокинного гена в тканях селезенки и легких оценивались по хронологическому принципу (у эмбрионов в возрасте 19 и 20 дней и у цыплят в возрасте 1 дня).

Результаты рассматривались на совещании.

Мониторинг репликации вакцинального штамма вируса CVI988 болезни Марека серотипа 1 в вакцинированных стадах, подвергавшихся воздействию онкогенным вирусом болезни Марека.

Мониторинг репликации вакцинального штамма вируса CVI988 БМ серотипа 1 в вакцинированных стадах в полевых условиях был затруднен из-за отсутствия соответствующей методики проведения ПЦР в режиме реального времени, которая позволила бы выявить различия между штаммом CVI988 и онкогенным штаммом MDV. Этому вопросу был посвящен доклад сотрудницы Университета штата Северная Каролина Анег-Лусии Кортес (Aneg Lucia Cortes).

Недавно на основе метода детекции неспаренных оснований (MAMA) была разработана методика проведения ПЦР в режиме реального времени, помогающая обнаружить уникальные отличия генов pp38 у вирусов штамма CVI988 и онкогенного штамма MDV.

В рамках данного исследования группа ученых из г. Роли применяла эту новую методику для оценки репликации вирусного штамма CVI 988 в медулле перьев цыплят, вакцинированных in ovo или в возрасте одного дня и подвергшихся действию онкогенного вируса MDV 648A контактным путем в 1 день.

Кортес рассказала, что, используя пособия по методу MAMA, они также оптимизировали протоколы взятия проб для мониторинга штамма CVI988 и ранней диагностики опухолей в полевых условиях.

Роль естественных киллеров в вакцинальном иммунитете к болезни Марека.

Противовирусная активность вакцинального иммунитета, значительно снижающая уровень цитолитической инфекции на ранней стадии, выработку внеклеточных инфекционных вирусных частиц в FFE и образования лимфомы путем нарушения обычного хода патогенных явлений, представляет собой важный фактор эффективности защитного механизма вакцин против БМ.

Представитель Лаборатории по изучению инфекционных и онкологических заболеваний птиц Службы сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США Мухаммед Хейдари (Mohammad Heidari) сообщил, что, несмотря на то, что вакцины против БМ применялись в течение многих десятилетий, молекулярный механизм их защиты не раскрыт. Появляется все больше фактов, подтверждающих то, что естественные киллеры играют важную роль в обеспечении вакцинальной защиты и формировании генетической резистентности и противоопухолевого иммунитета.

Сравнительный анализ функциональной активности естественных киллеров в организме вакцинированных и ранее не болевших цыплят показал, что вакцинация активизирует естественных киллеров за счет увеличения протеазосодержащих гранул и выработки γ-интерферонов.

Хейдари сделал вывод о том, что позитивная регуляция антител CD107a, функциональных маркеров активности естественных киллеров, предположительно вызывает дегрануляцию активированных естественных киллеров при смешивании их с клетками-мишенями.

Безопасность и эффективность обратного пассажа вакцинального вируса rMd5-delta-Meq для цыплят

Люси Ф. Ли (Lucy F. Lee), представляющая Лабораторию по изучению инфекционных и онкологических заболеваний птиц Службы сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США, объяснила, что фрагмент MDV EcoR1-Q вирусного генома кодирует ген meq (MDV EcoQ). Meq является уникальным онкогеном, существующим только в серотипе 1 MDV и равным образом экспрессирует во всех латентных клетках или клетках опухоли MDV.

Ген meq был удален из высоковирулентного генома rMd5 и назван rMd5-delta-Meq или нуль-вирус meq. Этот вирус показал себя как возможная эффективная вакцина как для серопозитивных цыплят (+), так и серонегативных цыплят (–). Однако нуль-вирус meq вызывает бурсальную и тимусную атрофию (БТА) у серонегативных цыплят (–) и не оказывает влияния на серопозитивных коммерческих цыплят (+).

БТА у серонегативных цыплят (–) рассматривается как проблема угрозы здоровью и послужит препятствием для коммерциализации и лицензирования вакцины.

Ли и ее коллеги избавились от БТА на 40-ом пассаже в клеточные культуры, и по эффективности полученный вирус был аналогичен нуль-вирусу meq на 19 пассаже (p) в организм серонегативных цыплят (–), но не оказал влияние в случае с серопозитивными цыплятами (+).

Обратный пассаж вируса в организм цыплят — еще одна стратегия, обычно используемая для улучшения эффективности вакцины. Исследователи провели обратный пассаж нуль-вируса meq p19 в организм цыплят, по пять пассажей с интервалами в две недели. Полученный вирус лучше реплицировался у цыплят, оставался непатогенным и осуществлял защиту на том же уровне, что и нуль-вирус meq p19, от воздействия высоковирулентного плюс штамма 686 вируса MDV.

Различия в эффективности действия дозы коммерческой вакцины на основе штамма CVI988 против заражения высоковирулентным плюс вирусом болезни Марека в раннем возрасте

Вакцины против БМ в большинстве случаев связаны с клетками и требуют особых условий обращения, хранения и введения. Тарсисио Вильялобос (Tarsicio Villalobos), представляющий компанию «Зоэтис Инк.» (Zoetis Inc.), рассказал, что нарушение функционирования холодовой цепи, ненадлежащие условия замораживания-размораживания, а также восстановление в неподходящих разбавителях может сильно сократить количество титров вакцины.

Не существует единого мнения относительно минимальной дозы вакцины в БОЕ, необходимой для того, чтобы гарантировать развитие защитного иммунитета.

Эффективность вакцины зависит не только от введенной дозы. Были указаны различия защитной способности вакцины на основе штамма CVI988, выпущенной разными производителями. Различные уровни аттенуации клеточной культуры или различие способов обращения со штаммами, на основе которых изготавливается вакцина, могли стать причиной таких расхождений в результатах.

Вильялобос объясняет, что целью этого исследования являлась оценка того, влияет ли происхождение вакцины на основе штамма CVI988 и ее доза на эффективность защиты от заражения высоковирулентным плюс вирусом болезни Марека в раннем возрасте.

Была проведена вакцинация in ovo двух генетических линий бройлеров-производителей (МО = медленно оперяющихся и БО = быстро оперяющихся) двумя коммерческими вакцинами на основе штамма CVI988 (A и B) в двух различных дозах (ВД = доза, рекомендованная производителем, и НД = 2 000 БОЕ).

При вылуплении цыплят объединили с цыплятами в возрасте 15 дней, привитых 500 БОЕ высоковирулентного (+) штамма MDV 648A, когда они находились в возрасте одного дня.

Эффективность вакцины оценивалась при помощи индекса защиты от БМ (ИЗ = % БМ у невакцинированных цыплят – % БМ у вакцинированных цыплят / % БМ вакцинированных × 100) в обеих генетических линях и при разных дозах вакцины.

Среди медленно оперяющихся цыплят, получивших низкую дозу вакцины (НД), независимо от типа вакцины наблюдался более высокий уровень смертности, чем среди тех цыплят, которые получили дозу, рекомендованную производителем (ВД). Среди быстро оперяющихся цыплят различия между ВД и НД были менее заметны. В группах, получивших вакцину производства компании A в НД, наблюдалось значительно большее количество случаев поражения БМ, чем в других группах. Между группами, получившими высокую дозу вакцины на основе штамма CVI988 любого из производителей и низкую дозу вакцины производства компании B, не было обнаружено значительных различий.

Вильялобос отметил, что в ходе этого исследования вакцина производства компании A с дозой 2 000 БОЕ показала худшие результаты с точки зрения защиты. Не наблюдалось различий в защите от развития БМ между вакцинами компаний A и B, когда вакцина использовалась в рекомендованной дозе (высокой дозе).





Просмотров: 1157

Возврат к списку